柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)

产品货号：

WE0177

中文名称：

柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)

英文名称：

Blood gDNA Midi Extraction Kit(1-5ml)

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血（用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本制品可以处理1～5mL的全血，可纯化获得大小为100bp到50kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。

组分	规格
Buffer RCL	3×260mL
Buffer GR	25mL
Buffer GL	25mL
Buffer GW1(浓缩液)	13mL
Buffer GW2(浓缩液)	15mL
Buffer GE	15mL
Proteinase K	50mg
Proteinase K Storage Buffer	5mL
吸附柱DL及收集管	50套

保存：室温，其中Buffer RCL置于2～8℃。

自备试剂

无水乙醇。

向Proteinase K中加入5mL Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
本试剂盒最多可以提取1～5mL全血样品，如需提取大量血液样本请选用血液基因组DNA提取试剂盒(货号：WE0176)。
第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请置于56℃水浴重新溶解。
如下游实验对RNA污染较敏感，可加入4μL DNase Free的RNase A（100mg/mL），RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购RNase A溶液(100mg/mL)(货号：WE0225)。
试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。

向离心管（自备）中加入1～5mL血液样品，加入3倍体积的Buffer RCL轻轻涡旋或颠倒混匀。
3000rpm（~900×g）离心10分钟，小心吸弃上清。
向沉淀中加入400μL Buffer GR，重悬沉淀。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。
1～2mL血液样本提取时，向以上溶液中加入40μL Proteinase K，混匀；2～5mL血液样本提取时，向以上溶液中加入100μL Proteinase K，混匀。
加入400μL Buffer GL，颠倒混匀15次，剧烈涡旋震荡至少1分钟。
注意：不要直接将Proteinase K直接加入到Buffer GL中。
70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：
- 如溶液未彻底清亮，补加适量Proteinase K，孵育。延长孵育时间至溶液完全清亮为止。
- 孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
加入400μL无水乙醇，颠倒混匀10次。短暂离心，使管壁和管盖上液体集中到管底。
将上步所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DL中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(~13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤9。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。
12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50～200μL Buffer GE或灭菌水，室温下放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
- 离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
- 用另外的50～200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
- 如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤12所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，12000rpm离心1min；若洗脱体积小于200μL，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
- 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

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